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細(xì)胞的體外培養(yǎng)檢測產(chǎn)品生物性能

發(fā)布日期: 2013-08-15
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1.實驗?zāi)康模?/strong>

通過細(xì)胞的體外培養(yǎng)來檢測產(chǎn)品的生物性能是否達(dá)到要求。

2.實驗原理:

體外培養(yǎng)的細(xì)胞株要在體外持續(xù)地培養(yǎng)就必須傳代,以便獲得穩(wěn)定的細(xì)胞株或得到大量的同種細(xì)胞,并維持細(xì)胞種的延續(xù)。培養(yǎng)的細(xì)胞形成單層匯合以后,由于密度過大生存空間不足而引起營養(yǎng)枯竭,將培養(yǎng)的細(xì)胞分散,從容器中取出,以1:2或l:3以上的比率轉(zhuǎn)移到另外的容器中進(jìn)行培養(yǎng),即為傳代培養(yǎng)。通過貼壁細(xì)胞的傳代培養(yǎng),觀察細(xì)胞的生長狀態(tài)可以反映出培養(yǎng)產(chǎn)品是否達(dá)到細(xì)胞培養(yǎng)的要求。

3.實驗材料:

3.1 抽檢樣品:

3.2 細(xì)胞株:VERO細(xì)胞系:*貼壁細(xì)胞,主要用于接種病毒的一種細(xì)胞。

3.3 實驗試劑:RPMI1640(8111031)、0.25%胰酶(876536)、小牛血清(8187648)、都購自廣州英韋創(chuàng)津生物試劑公司。

3.4 實驗耗材:3ml的巴斯德吸管、酒精燈、鑷子、酒精棉球。

3.5 實驗儀器:XDS-1倒置顯微鏡購自廣州粵顯光學(xué)儀器科技有限公司;

超凈工作臺購自蘇州凈化儀器設(shè)備公司;

4.實驗步驟:

4.1. 在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和密度,取生長良好的細(xì)胞若干瓶,棄掉舊培養(yǎng)液。

4.2. 加入胰酶消化細(xì)胞,消化適度后倒去胰酶。

4.3. 加入適量培養(yǎng)液反復(fù)吹打數(shù)次。

4.4. 細(xì)胞計數(shù)稀釋細(xì)胞密度為1×105/ml

4.5. 將細(xì)胞接種于抽檢樣品中:

5.實驗結(jié)果:

1、Vero細(xì)胞培養(yǎng)24小時后10×10倍下圖片

2、Vero細(xì)胞培養(yǎng)48小時后10×10倍下圖片

3、細(xì)胞計數(shù)

6.結(jié)果判定

這次抽檢樣品做細(xì)胞培養(yǎng)檢測,細(xì)胞生長狀態(tài)正常,貼壁生長良好,10%血清培養(yǎng)液培養(yǎng),細(xì)胞增長率符合企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。

 
 

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